1. La manipulation des échantillons
1) traitement des tissus : couper de petits morceaux de tissu et ajouter les PBS ou 0,9 % de solution saline normale,
Meuler le tissu soigneusement avec un homogénéisateur, centrifugate électrique et de prendre le liquide surnageant
Pour la deuxième étape de la lyse.
2) coton-tige : transfert de traitement de l'écouvillon effacé dans la gorge, le nez et autres pièces à une 2ml
Tube à centrifuger, ajouter une quantité appropriée de PBS (200 μl de PBS tremper la nuit est mieux), prendre l'
Le liquide surnageant pour la deuxième étape de la lyse.
3) des cellules : méthode de lyse directe : la deuxième étape de la lyse est effectué immédiatement.
2. Prendre 200 μl de l'échantillon après la première étape de traitement, d'ajouter 200 μl de tampon GTC, Vortex
L'agitation pendant 30s, 56 ºC bain d'eau pour 10min.
3. Ajouter 250 μl d'isopropanol de qualité pharmaceutique nationale et laisser reposer pendant 5 min à température ambiante.
Transfert de toutes les solutions à la colonne d'adsorption, centrifugate à 12000 tr/min pendant 1 min,
Jeter les déchets liquides dans le tube de collecte et de mettre l'adsorption dans la colonne
Tube de collecte de nouveau.
4. Ajouter 600 μl de tampon de lavage à la colonne d'adsorption, centrifugate à 12000 tr/min pendant 1 min,
Jeter le liquide dans la collecte des déchets tube, et ensuite mettre l'adsorption dans la colonne
Tube de collecte de nouveau.
5. Répétez l'étape 4.
6.Mettre l'adsorption de colonne dans la collection de tuyaux et centrifugate à 12000 tr/min pendant 2 min.
Remarque : les étapes ne devrait pas être omis de veiller à ce que la solution de nettoyage résiduel de l'
L'adsorption colonne est supprimée.
Mettre la colonne d'adsorption dans un tube à centrifuger de 1,5 ml propre, ouvrez le capot de l'adsorption
La colonne, laisser à température ambiante pendant 2 min, ajouter 30-50μl de tampon éluante l'adsorption
La colonne, laisser à température ambiante pour 2-5min, et il centrifugate à 12000 tr/min pendant 2 min à
Obtenir l'acide nucléique viral. Stockage à court terme à - 80 ºC