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[Usage prévu]
Le kit de détection des acides nucléiques du virus de la variole du singe (PCR par fluorescence) est utilisé pour la détection des acides nucléiques du virus de la variole du virus dans le sérum et les échantillons d'éruptions cutanées pustules ou vésiculaires humaines provenant de personnes soupçonnées d'être infectieuses du virus de la variole du singe. En détectant spécifiquement les fragments d'acide nucléique du virus de la variole du singe, le virus de la variole du singe peut être rapidement identifié, ce qui est approprié pour le diagnostic rapide de maladies connexes causées par l'infection par le virus de la variole du singe.
[Spécification de l'emballage]
25 tests/boîte, 50 tests/boîte
| NON | Composants | 25 tests/kit | 50 tests/kit | Composants principaux |
| 1 | Mélange de détection VMP-PCR | 950 μl/tube, 1 tube | 950 μl/tube, 2 tubes | Amorces, sondes, dNTP, tampon PCR, etc |
| 2 | Mélange VMP-enzyme | 50 μl/tube, 1 tube | 100 μl/tube, 1 tube | H-Taq, UNG |
| 3 | Produit de contrôle positif VMP | 500 μl/tube, 1 tube | 500 μl/tube, 1 tube | Clonage de plasmides pour des fragments de gènes cibles |
| 4 | VMP-produit de contrôle négatif | 500 μl/tube, 1 tube | 500 μl/tube, 1 tube | Solution saline stérilisée |
Remarque :
Les kits avec des numéros de lot différents ne sont pas interchangeables.
Tous les échantillons biologiques de la trousse ont été éteints.
[Exemple d'exigence]
1.Type d'échantillon
Échantillons de sérum et d'éruptions cutanées pustulaires ou vésiculaires humaines.
Prélèvement d'échantillons
Sérum : utiliser une seringue stérile pour prélever 2 ml de sang veineux du patient, l'injecter dans un tube de prélèvement stérile, le laisser à température ambiante pendant 4 heures au plus, attendre que l'échantillon se sépare du sérum, Ou centrifuger à 4000 tr/min pendant 5 minutes à température ambiante pour séparer le sérum et le transférer dans un tube à centrifuger stérile de rechange de 1,5 ml. Prélèvement d'échantillons de vésicules et de pustules : Sélectionner les vésicules ou les pustules fraîches sur la peau, les désinfecter avec de l'iodophore, puis essuyer l'iodophore avec de l'alcool à 70 %. Une fois l'alcool complètement évaporé, utiliser une aiguille stérile pour percer et essorer le liquide tissulaire, plonger le coton-tige dans le liquide, placer rapidement le coton-tige dans le tube d'échantillonnage de 3-5 ml contenant la solution de préservation, casser le coton-tige près du haut, serrer le bouchon du tube et le sceller pour inspection.
3. Stockage et expédition des échantillons
Les échantillons collectés doivent être envoyés immédiatement pour test. Les échantillons doivent être testés dans les 24 heures s'ils sont conservés entre 2 ºC et 8 ºC. Les échantillons qui ne peuvent pas être testés dans les 24 heures doivent être conservés à -70 C ou moins (en l'absence de conditions de stockage de -70 ºC , les échantillons peuvent être conservés entre -25 ºC et -15 ºC pendant 10 jours). Il est recommandé d'éviter les cycles de gel/dégel multiples. Les échantillons doivent être transportés dans un pichet congelé scellé avec de la glace ou dans une boîte en mousse scellée avec de la glace.
[Méthode de test]
Veuillez lire les instructions du kit de test avant utilisation.
1.préparation des réactifs (dans la zone de préparation des réactifs)
1.1 retirez les composants de la boîte et placez-les à température ambiante. Une fois la température équilibrée à la température ambiante, bien mélanger et centrifuger brièvement pour une utilisation ultérieure. Selon le nombre d'échantillons à tester, les contrôles négatifs et les contrôles positifs, prendre la quantité correspondante de composants proportionnellement (38 μl/personne de solution de réaction VMP-PCR + 2 μl/personne de mélange VMP-enzyme) et les mélanger soigneusement pour former un mélange PCR. Liquid-1, qui a été utilisé après centrifugation instantanée.
1.2 transférer les réactifs préparés ci-dessus dans la zone de traitement des échantillons pour utilisation.
Traitement des échantillons (dans la zone de traitement des échantillons)
2.1 extraction des échantillons :
Le kit d'extraction d'acides nucléiques doit être utilisé pour l'extraction d'échantillons.
Le contrôle négatif, le contrôle positif et les échantillons à tester sont traités simultanément.
2.2 Ajouter un échantillon
Ajouter 10 μl d'ADN extrait dans les tubes PCR dans l'ordre suivant : contrôle négatif VMP, contrôle positif VMP et échantillon à tester. Ajouter 40 μl de mélange principal de monospace dans chaque puits. Chaque puits a été bouché. Centrifugé à 2000 tr/min pendant 10 secondes, et placé sur une machine PCR fluorescente.
3.amplification PCR (dans la zone d'amplification et d'analyse)
Pour les réglages, se reporter au manuel d'instructions de chaque appareil.
3.1 placer les tubes de réaction PCR qui ont terminé l'ajout d'échantillons dans l'instrument PCR de fluorescence, placer les trous d'essai selon la séquence correspondante d'ajout d'échantillons, définir les trous d'essai pour les produits de contrôle qualité positifs, les produits de contrôle qualité négatifs et les échantillons inconnus, et définir le nom de l'échantillon.
3.2 système de réaction total : 25 μl
3.3 sélection du canal de détection de fluorescence:1) sélectionnez le canal FAM (reporter: FAM, Quencher: None) pour détecter les gènes cibles du virus monkeypox: 2) sélectionnez le canal HEX ou VIC (reporter: HEX/VIC, Quencher: None); 3) réglez la fluorescence de référence (référence passive) sur NONE ; définissez le volume d'échantillon sur 50.
3.4 Réglage du paramètre cyclique :
Remarque : utilisez l'instrument PCR quantitatif à fluorescence Ra-Time ABI 7500, et choisissez « aucun » pour la référence passive et le quencher.
4.analyse des résultats
Après la réaction, les résultats sont automatiquement enregistrés et la ligne de base et le seuil de chaque canal de détection sont ajustés en fonction des images analysées. Cliquez sur « analyse » pour effectuer l'analyse afin que tous les paramètres répondent aux exigences du contrôle qualité, puis vérifiez les résultats de détection de chaque échantillon inconnu.
5.contrôle de qualité
Produits de contrôle négatif : la courbe FAM n'a pas de valeur CT ou CT > 40 ; et la détection standard interne du virus de la variole du singe (HEX/VIC) n'a pas de valeur CT ou CT > 40.
Produits de contrôle positif : courbe de FAM CS35; et la détection standard interne du virus de la variole du singe (HEX/VIC) est positive, CT≤35.
si les deux éléments ci-dessus sont réunis en même temps dans le cadre de la même inspection, sinon, la deuxième inspection est considérée comme invalide et une nouvelle inspection est requise.
[Valeur de référence positive]
L'étude des valeurs de référence a permis de déterminer que la valeur de référence de la CT du gène cible détecté par ce kit était de 40 et que la valeur de référence de la CT de l'étalon interne était de 40.
[Interprétation des résultats de test]
1.valeur CT de détection FAM ≤ 40, et la détection de l'étalon interne est positive (valeur CT ≤ 40), rapportée comme étant le virus de la variole du singe positif;
2.aucune valeur CT ou valeur CT > 40 dans la détection FAM, et la détection de canal standard interne est positive (valeur CT ≤ 40), et le rapport est négatif pour le virus de la variole du singe ;
3.lf il n'y a pas de valeur CT ou de valeur CT > 40 dans le test standard interne, le résultat du test de l'échantillon n'est pas valide. La cause doit être trouvée et éliminée, et l'échantillon doit être échantillonné de nouveau et testé (si le résultat du test répété est toujours invalide, veuillez contacter la société).
4.pour les échantillons positifs, le résultat de l'essai standard interne n'est pas requis; pour les échantillons négatifs, l'essai standard interne doit être positif. si l'essai standard interne est négatif, le résultat de l'essai de l'échantillon est invalide. Les échantillons sont rééchantillonnés et des expériences répétées sont effectuées (si les résultats des expériences répétées sont toujours invalides, veuillez contacter notre société).
[Valeur de référence positive]
L'étude des valeurs de référence a permis de déterminer que la valeur de référence de la CT du gène cible détecté par ce kit était de 40 et que la valeur de référence de la CT de l'étalon interne était de 40.
[Interprétation des résultats de test]
1.valeur CT de détection FAM ≤ 40, et la détection de l'étalon interne est positive (valeur CT ≤ 40), rapportée comme étant le virus de la variole du singe positif;
2.aucune valeur CT ou valeur CT > 40 dans la détection FAM, et la détection de canal standard interne est positive (valeur CT ≤ 40), et le rapport est négatif pour le virus de la variole du singe ;
3.lf il n'y a pas de valeur CT ou de valeur CT > 40 dans le test standard interne, le résultat du test de l'échantillon n'est pas valide. La cause doit être trouvée et éliminée, et l'échantillon doit être échantillonné de nouveau et testé (si le résultat du test répété est toujours invalide, veuillez contacter la société).
4.pour les échantillons positifs, le résultat de l'essai standard interne n'est pas requis; pour les échantillons négatifs, l'essai standard interne doit être positif. si l'essai standard interne est négatif, le résultat de l'essai de l'échantillon est invalide. Les échantillons sont rééchantillonnés et des expériences répétées sont effectuées (si les résultats des expériences répétées sont toujours invalides, veuillez contacter notre société).
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