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Kit de détection de mutation génique EGFR 29 humaine (PCR en temps réel) UTILISATION PRÉVUE Ce kit de test est utilisé pour le test qualitatif in vitro Détection de mutations communes dans les exons 18-21 de l'EGFR gène dans les échantillons de patients humains non-petits cellules de cancer de poumon (Reportez-vous au Tableau 1 pour plus de détails) Le cancer du poumon est devenu la principale cause de décès par cancer dans le monde, ce qui menace gravement la santé humaine. Chez les patients atteints d'un cancer du poumon, le cancer du poumon non à petites cellules représente environ 80 %. L'EGFR est actuellement la cible moléculaire la plus importante pour le traitement du cancer du poumon non à petites cellules. La phosphorylation de l'EGFR peut favoriser la croissance des cellules tumorales, la différenciation, l'invasion, la métastase, l'anti-apoptose, et promouvoir l'angiogenèse tumorale. L'inhibiteur de tyrosine kinase (TKI) de l'EGFR peut bloquer la voie de transduction du signal de l'EGFR en inhibant l'autophosphorylation de l'EGFR, inhibant ainsi la prolifération et la différenciation des cellules tumorales, favorisant l'apoptose des cellules tumorales, réduisant l'angiogenèse tumorale, etc., afin d'obtenir la récupération tumorale. Thérapie ciblée [1]. Un grand nombre d'études ont montré que l'efficacité thérapeutique de l'EGFR-TKI est étroitement liée à l'état des mutations du gène EGFR et peut spécifiquement inhiber la croissance des cellules tumorales avec des mutations du gène EGFR [2~3]. Le gène EGFR est situé sur le bras court du chromosome 7 (7p12), d'une longueur totale de 200 Ko, composé de 28 exons. La région de mutation est principalement localisée dans les exons 18-21, parmi lesquels les codons 746-753 sur l'exon 19 sont des mutations manquantes qui représentent environ 45% des mutations, et la mutation L858R sur l'exon 21 représente environ 40% à 45% [4]. Les « lignes directrices du NCCN pour le diagnostic et le traitement du cancer du poumon non à petites cellules » indiquent clairement que le test de mutation génique de l'EGFR est nécessaire avant le traitement par l'EGFR-TKI. Ce kit de test est utilisé pour guider le traitement des médicaments d'inhibiteur de tyrosine kinase des récepteurs du facteur de croissance épidermique (EGFR-TKI) et pour fournir une base pour la médecine personnalisée pour les patients atteints de cancer du poumon non à petites cellules. Ce kit est utilisé uniquement pour la détection de mutations courantes du gène EGFR chez les patients atteints d'un cancer du poumon non à petites cellules. Les résultats des tests sont uniquement à titre de référence clinique et ne doivent pas servir de base unique pour le traitement individualisé des patients. Les cliniciens doivent combiner l'état du patient, les indications de médicaments et les facteurs de traitement, tels que la réaction et d'autres indicateurs de tests de laboratoire, afin de juger les résultats des tests. PRINCIPE DE TEST Ce kit de détection utilise une solution d'enrichissement PCR, la technologie ARMS (amplification Retrient mutation system) et la méthode combinée TaqMan pour détecter les mutations L858R, 19del et d'autres mutations EGFR courantes. En enrichissant les sites de mutation par PCR, la résolution et la sensibilité de la détection sont encore améliorées. Les sondes TaqMan sont étiquetées avec un fluorophore marqueur FAM et un fluorophore quencher BHQ2. Lorsque la sonde est intacte, le signal fluorescent émis par le groupe de rapporteurs est absorbé par le groupe de trempe ; Pendant l'amplification PCR, l'activité exonucléase 5'-3' de l'enzyme Taq cligne et dégrade la sonde, ce qui permet de séparer le groupe fluorescent du marqueur et le fluorophore de désactivation afin que le système de surveillance de fluorescence puisse recevoir le signal de fluorescence. La solution d'enrichissement PCR réduit la séquence de fond de type sauvage par la digestion enzymatique de restriction et améliore encore la résolution et la sensibilité de la détection. Les caractéristiques de la méthode ARMS: Taq ADN polymérase, qui n'a pas d'activité exonucléase 3'-5', peut reconnaître spécifiquement l'extrémité 3'de l'amorce. Ce n'est que lorsque l'extrémité 3'de l'amorce est complètement assortie que le fragment au site de mutation peut être amplifié normalement. Lorsque l'extrémité 3 pi de l'apprêt est mal assortie, il ne peut pas être amplifié de façon efficace. Par conséquent, l'utilisation de cette méthode peut amplifier sélectivement la séquence mutante, et la sonde TaqMan est combinée avec le produit amplifié pour identifier la séquence cible de la mutation. La zone de détection choisie par la solution de réaction de contrôle interne est un segment relativement conservateur sur l'exon 2 du gène EGFR humain, environ 120 PB, comme contrôle de la qualité des réactifs, de la qualité de l'ADN et de l'opération elle-même. Même si l'ADN est dégradé, le contrôle interne peut vraiment réagir au système. Quantité effective d'ADN dans le gène. Le système de détection contient une certaine proportion de dUTP, dNTP et uracile ADN glycosylase (enzyme UDG), cette enzyme (également appelée uracile-N-glycosylase ou UNG enzyme) peut interrompre la PCR contenant le produit dUTP, empêchant ainsi efficacement la contamination par PCR.
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